植物生理学 试验4叶绿素提取
产品简介: ? 低温下产生皂化反响的叶绿体色素溶液,易乳 化而呈现白色絮状物,溶液污浊,且不分层 叶绿素a与b很 类似,不同之 处仅在于Chla 第二个吡咯环 上的一个甲基 (-CH3)被醛基 (-CHO)所替代 即Chlb。 强吸收区: 400-500 (蓝紫); 不吸收区:500以上(呈黄 色或棕色) 1. 新鲜菠菜叶片,剪碎成小块(去掉中脉)混匀; 2. 称取剪碎的样品
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? 低温下产生皂化反响的叶绿体色素溶液,易乳 化而呈现白色絮状物,溶液污浊,且不分层
叶绿素a与b很 类似,不同之 处仅在于Chla 第二个吡咯环 上的一个甲基 (-CH3)被醛基 (-CHO)所替代 即Chlb。
强吸收区: 400-500 (蓝紫); 不吸收区:500以上(呈黄 色或棕色)
1. 新鲜菠菜叶片,剪碎成小块(去掉中脉)混匀; 2. 称取剪碎的样品3 g,放入研钵中,加少数石英砂和碳酸
镁粉及2-3 ml的95%乙醇,研磨匀浆(豆浆状),再加 乙醇混匀; 3. 过滤到25 ml容量瓶中,用少数乙醇冲刷研钵、研棒及残 渣,最终连同残渣一同过滤( 直至滤纸和残渣中无绿色 停止)最终用乙醇定容至25ml,摇匀。
– 稀酸: ? 取5 ml叶绿素原液,一滴滴参加醋酸,调查色彩改变; ? 向上述加醋酸的叶绿素溶液中加少数CuAc颗粒,65℃ 水浴加热,调查其色彩改变。
?提取叶绿素 ?叶绿素的物理性质 ?叶绿素的化学性质 ?叶绿素含量的测定
– 吸收光谱 – 荧光现象 2.3 叶绿素的化学性质 – 替代反响 – 皂化反响
? 叶绿素a、b在红光区的最大吸收峰别离坐落663 nm 和645 nm;
? 叶绿素a、b在652 nm处有相同的比吸收系数(均为34.5), 测OD652求出叶绿素a、b总量。
– 取出冷却后,先加3 ml苯,再加3 ml水(沿壁渐渐参加), 悄悄摇匀,静置调查其分层现象。
5.2 制作叶绿素吸收光谱曲线 叶绿素含量计算公式 叶绿素的含量( mg / g)= [叶绿素的浓度 ×体积×
1) 叶绿素吸收光谱 以95%乙醇作为空白对照,在400-700 nm之间,每隔20 nm读OD值,然后以波长为横坐标,以OD为纵坐标作图
? 稀酸 – 叶绿素溶液与稀酸效果,H替代Mg后的产品为褐色的 去镁叶绿素;
– 去镁叶绿素与Cu2 或Zn2效果, Cu2 等离子替代后的 产品为铜代叶绿素等,深绿色;
? 浓酸 – 叶绿素溶液与浓酸效果,除了代换Mg外,可使去镁叶 绿素敏捷分解出叶绿醇,并构成去镁叶绿酸,呈褐绿色。
① 提取时为何要参加MgCO3? ② 为何选用652 nm 测叶绿素的含量? ③ 解说皂化反响的分层现象。
– 以95%乙醇作为空白对照,在 400-700 nm 之间,每隔 20 nm 读OD值,然后以波长为横坐标,以 OD为纵坐标作图
① 操作应在弱光下进行 ? ② 研磨时刻尽可能短,以不超越2分钟为宜 ③ 分光光度计的正确运用(替换波长后要调0) ④ 皂化反响最终做
在低温下产生皂化反响的叶绿体色素溶液,易乳化 而呈现白絮状物,溶液污浊,且不分层。可剧烈摇 匀,放在30-40℃的水浴中加热,溶液很快分层, 絮状物消失,溶液变得明澈通明。
叶绿素→去镁叶绿素→铜代叶 绿素(安稳而不易降解,常用 醋酸铜处理来保存绿色植物标 本)
? 叶绿酸是二羧酸,其间一个羧基被甲醇酯化,另一 个被叶绿醇酯化。叶绿素是叶绿酸的酯,能产生皂 化反响。
? 叶绿素的盐构成今后,因分子极性增大,易溶 于稀酒精溶液中,不能进入苯层
皂化分层叶绿素的盐构成今后因分子极性增大易溶于稀酒精溶液中不能进入苯层一部分苯涣散在水中构成乳胶体呈现一层乳白色的溶液低温下产生皂化反响的叶绿体色素溶液易乳化而呈现白色絮状物溶液污浊且不分层资料菠菜叶片仪器设备研钵漏斗剪刀试管试管夹容量瓶分光光度计水浴试剂95乙醇苯浓盐酸36石英砂41叶绿素的提取放入研钵中加少数石英砂和碳酸镁粉及23ml95乙醇研磨匀浆豆浆状再加乙醇混匀